Саратовский научно-медицинский ЖУРНАЛ

ФГБУН «Институт цитологии РАН»

Экспериментальное исследование синтетических полимерных материалов как основы в создании перспективных матриц-носителей для культивирования лимбаль-ных стволовых клеток

Год: 2019, том 15 Номер: №2 Страницы: 495-501
Рубрика: Глазные болезни Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Карпович В.В., Куликов А.Н., Чурашов С.В., Черныш В.Ф., Григорьев С.Г., Блинова М.И., Нащекина Ю.А., Александрова О.И., Хорольская Ю.И., Никонов П.О., Цобкалло Е.С., Москалюк О.А., Мельников А.С., Сердобинцев П.Ю., Машель Т.В., Писугина Г.А., Переплетчикова Д.А., Хороших Д.А.
Организация: ФГБУН «Институт цитологии РАН», ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет», ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет промышленных технологий и дизайна», ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова» Минобороны России, ФГАОУ ВО «Санкт-Петербургский политехнический университет»
Резюме:

Цель: изучить в эксперименте свойства трех различных видов синтетических полиэфирных матриц, провести их сравнительную оценку и определить оптимальную в качестве носителя для культивирования и трансплантации лимбальных стволовых клеток при устранении лимбальной недостаточности. Материал и методы. Проводилась оценка прозрачности, механических свойств (прочность, относительное удлинение при разрыве, модуль жесткости), биосовместимости с клеточными культурами роговицы, а также изучались сроки биодеградации матриц в условиях in vivo. Результаты. В ходе исследования изучены оптические имеханические свойства матриц, изготовленных из полилактид-гликолида (ПЛГ), полилактид- капролактона (ПЛК) и поли-Е-капролактона (ПКЛ). Экспериментально показано, что лимбальные стволовые клетки человека и кролика, а также клетки эпителия роговицы человека адгезировали на поверхности всех типов исследуемых матриц, в процессе культивирования сохраняли типичное строение актинового цитоскелета, способность к пролиферации и миграции. Выявлены различия во взаимодействии разных клеточных культур с различными типами носителей. Сроки биодеградации матриц из ПЛК толщиной 5 мкм составили около 30 суток. Заключение. Полученные результаты указывают на возможность использования матриц из ПЛК толщиной 5 мкм в качестве носителя культивируемых лимбальных стволовых клеток.

Прикрепленный файлРазмер
2019_02-1_495-501.pdf1.03 Мб

К вопросу о подготовке амниотической мембраны в качестве скаффолда для культивируемых клеток при создании биоинженерных конструкций роговицы

Год: 2019, том 15 Номер: №2 Страницы: 409-413
Рубрика: Глазные болезни Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Александрова О.И, Гаврилюк И.О., Машель Т.В., Черныш В.Ф., Чурашов С.В., Куликов А.Н., Блинова М.И.
Организация: ФГБУН «Институт цитологии РАН», ФГБВОУ "Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова", ФГАОУ ВО «Санкт-Петербургский политехнический университет»
Резюме:

Цель: определить необходимую подготовку амниотической мембраны (АМ), позволяющую использовать ее в качестве скаффолда для культивируемых клеток при создании биоинженерных конструкций (БИК). Материал и методы. Нативную АМ иммобилизировали в специальном зажимном устройстве и подвергали дополнительной механической, термической и ферментативной обработке: удаляли остатки слизи с ее поверхности, проводили криоконсервирование АМ-скаффолдов при –80оС, –20оС и их децеллюляризацию 0,25 %-м раствором смеси Tripsin-EDTA. Прижизненную оценку морфологии культивируемых на АМ- скаффолдах клеток осуществляли под инвертированным микроскопом Nikon Eclipse TS100, оснащенным фотокамерой. Жизнеспособность и метаболическую активность клеток АМ определяли посредством МТТ-теста с помощью планшетного спектрофотометра АИФР-01 УНИПЛАН (Пикон, Россия) при длине волны 570 нм и референсной длине волны 620 нм. Результаты. Установлено, что присутствие на поверхности нативной АМ остатков слизи, не удаляющихся при стандартной механической обработке, негативно влияет на выживаемость клеточной тест-системы. Определена возможность криоконсервации АМ-скаффолдов, а также выявлено позитивное влияние процессов их криоконсервации и ферментативной децеллюляризации на жизнеспособность культивируемых на скаффол-дах клеток. Заключение. Стандартная механическая обработка нативной АМ не гарантирует полную очистку ее поверхности от остатков слизи, которые мешают адгезии и равномерному распределению культивируемых клеток. Необходимо достоверно контролируемое удаление слизи поверхности АМ перед их иммобилизацией и дальнейшими манипуляциями. Криоконсервация и последующая децеллюляризация АМ-скаффолдов способствуют увеличению жизнеспособности клеточной тест-системы. Оптимальным из исследуемых субстратов для культивирования клеток оказались АМ-скаффолды, очищенные от амниотической слизи, прошедшие кри-оконсервацию при –80оС в смеси DMEM-F12 и DMSO (1:1) и ферментативную децеллюляризацию после размораживания.

Прикрепленный файлРазмер
2019_02-1_409-413.pdf1.63 Мб