Саратовский научно-медицинский ЖУРНАЛ

Осипов А.Н.

ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства», заведующий лабораторией, доктор биологических наук

Исследование эффективности применения аутологичных клеточных продуктов на основе жировой ткани для терапии тяжелых местных лучевых повреждений

Год: 2014, том 10 Номер: №4 Страницы: 838-844
Рубрика: радиационная медицина Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Еремин П.С., Пигалева Н.А., Мурзабеков М.Б., Лебедев В.Г., Лазарева Н.Л., Еремин И.И., Пулин А.А., Осипов А.Н., Бушманов А.Ю., Котенко К.В.
Организация: ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства»,
Резюме:

Цель: исследовать динамику заживления язвенной поверхности в зависимости от типа лучевой язвы и применяемого клеточного продукта на экспериментальной модели тяжелых местных лучевых поражений (МЛП) у крыс после действия мягких рентгеновских лучей. Материал и методы. Для проведения эксперимента использовали половозрелых самцов породы Wistar массой 180-200 г. В исследовании использовали стандартную модель тяжелых МЛП кожи при действии мягкого рентгеновского излучения на модифицированной установке РАП100-10. Выделение стромально-васкулярной фракции проводили посредством ферментативной обработки жировой ткани. Трансплантацию клеточных продуктов проводили на 20-е сутки после облучения в случае модели острого лучевого поражения (ранние лучевые язвы) и на 120-е сутки в случае модели отдаленных последствий лучевого поражения (хронические лучевые язвы). В качестве положительного контроля использовались аллогенные ММСК костного мозга крыс. Результаты. Впервые отработано применение аутологичных клеточных продуктов из жировой ткани на животной модели тяжелых МЛП. Установлено, что применение клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани для лечения ранних лучевых поражений не только дает более выраженный терапевтический эффект (по сравнению с применением ММСК), но и сам эффект можно наблюдать в более ранние сроки. На модели отдаленных последствий лучевого поражения терапевтический эффект оказывают все клеточные продукты. Заключение. Клеточные продукты на основе жировой ткани являются перспективным материалом для дальнейшего исследования и внедрения в клиническую практику лечения МЛП. Использование данной методики позволяет подобрать схему терапии, исходя из индивидуальных особенностей пациента и типа МЛП.

Прикрепленный файлРазмер
2014_04-01_838-844.pdf1.41 Мб

Особенности изменения числа фокусов белков уН2АХ и Rad51 в фибробластах кожи человека, подвергавшихся пролонгированному воздействию низкоинтенсивного рентгеновского излучения

Год: 2014, том 10 Номер: №4 Страницы: 739-743
Рубрика: Генетика Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Озеров И.В., Еремин П.С, Осипов А.Н., Еремин И.И., Цветкова А.Д., Гусева С.С., Иванова К.Ю., Гавриленко О.И., Пустовалова М.В., Сметанина Н.М., Грехова А.К., Лазарева Н.П., Пулин А.А., Максимова О.А., Гордеев А.В., Бушманов А.Ю., Котенко К.В.
Организация: ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства», , Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова
Резюме:

Цель: провести сравнительные исследования особенностей репарации двунитевых разрывов ДНК в клетках млекопитающих, подвергающихся острому и пролонгированному воздействию рентгеновского излучения с различной мощностью дозы. Материал и методы. Исследования выполнены на первичных культурах фи-бробластов, выделенных из биоптатов кожи здоровых добровольцев (женщины 29 и 30 лет). Облучение клеток проводили на рентгеновской биологической установке РУБ РУСТ-М1 (Россия) при температуре 37°С с мощностью дозы 400 мГр/мин (200 кВ, 2*2,4 мА, фильтр 1,5 мм AI) и 4 мГр/мин (50 кВ, 2*0,4 мА, фильтр 1,5 мм AI). Для анализа фокусов уН2АХ и Rad51 использовали иммуноцитохимическое окрашивание белков. Результаты. Проведено одновременное исследование кинетики формирования и деградации фокусов фосфорилированно-го гистона Н2АХ (уН2АХ) и ключевого белка гомологической рекомбинации Rad51 в клетках первичных фибро-бластов кожи человека, подвергавшихся острому и пролонгированному воздействию рентгеновского излучения с одинаковой накопленной дозой. Показано, что относительное число фокусов уН2АХ в пересчете на дозу облучения убывает с уменьшением мощности дозы, в то время как относительное число фокусов Rad51, наоборот, возрастает. Заключение. Полученные данные свидетельствуют о принципиальных различиях в соотношении вкладов негомологичного соединения концов и гомологической рекомбинации в репарацию ДНК в клетках, подвергавшихся острому или пролонгированному облучению.

Прикрепленный файлРазмер
2014_04-01_739-743.pdf321.12 кб

Влияние инкубации в гипертонических растворах хлорида натрия на повреждаемость ДНК лимфоцитов периферической крови человека у-излучением и перекисью водорода

Резюме:

Цель: изучить влияние инкубации в гипертонических растворах NaCI на относительный количественный выход однонитевых разрывов (ОР) и щелочно-лабильных сайтов (ЩС) ДНК, индуцированных у-излучением и перекисью водорода в лимфоцитах периферической крови человека in vitro. Материал и методы. Для исследований использовали лимфоциты, выделенные из периферической крови физически здоровых женщин-доноров в возрасте 21-26 лет. Облучение клеток в дозах 1, 2, 3 и 5 Гр проводили на установке «АГАТ-Р1» (Россия, источник у-излучения 60Со, мощность дозы 1 Гр/мин) при 4°С. С перекисью водорода (25, 50 и 100 мкмоль/л) клетки инкубировали 15 мин при 4°С. Анализ ОР и ЩС ДНК проводили с помощью метода ДНК-комет в щелочных условиях. Результаты. Инкубация клеток в 0,35 моль/л растворе NaCI (диссоциация негистоновых белков) приводит к увеличению выхода ОР и ЩС ДНК, индуцируемых у-излучением и перекисью водорода, приблизительно в 1,3 раза. Увеличение концентрации NaCI до 0,6 моль/л (диссоциация линкерного гистона Н1) приводит почти к двойному увеличению выхода повреждений ДНК (~ в 1,7-1,8 раза). Дальнейшее повышение концентрации NaCI, ведущее к нарушению структуры нуклеосом (1,2 моль/л) и почти полной депротеинизации хроматина (2 моль/л), увеличивает выход повреждений ДНК не столь выраженно, как предполагалось (~ в 2,2 раза при концентрации 2 моль/л). Заключение. Результаты исследований показали, что инкубация в гипертонических растворах NaCI значительно увеличивает чувствительность ДНК лимфоцитов к повреждающему действию свободных радикалов.

Прикрепленный файлРазмер
2014_04-01_735-739.pdf391.19 кб

Сравнительные исследования выхода однонитевых разрывов и щелочнолабильных сайтов ДН К при воздействии 365 нм ультрафиолетового и рентгеновского излучений на лимфоциты периферической крови человека

Резюме:

Цель; сравнить количественный выход однонитевых разрывов (ОР) и щелочнолабильных сайтов (ЩС) ДНК, индуцированных 365 нм ультрафиолетовым (УФ) и рентгеновским излучениями в лимфоцитах периферической крови человека in vitro. Материал и методы. Выделение лимфоцитов крови человека проводили путем центрифугирования в градиенте плотности фикол-верографин. Облучение клеток проводили на УФ-установке BLX-365 (длина волны 365±10 нм) и рентгеновской биологической установке РУБ РУСТ-М1. Анализ ОР и ЩС ДНК проводили с использованием метода ДНК-комет в щелочных условиях. Результаты. Впервые показано, что выход ОР и ЩС ДНК в лимфоцитах крови человека при воздействии 365 нм УФ излучения в дозе 10 кДж/м2 соответствует эффекту рентгеновского излучения ~ в дозе 1 Гр. Заключение. Воздействие 365 нм УФ излучения в дозе 1 кДж/м2 на лимфоциты периферической крови человека индуцирует -100 ОР ДНК на клетку.

Прикрепленный файлРазмер
2013_04-01_791-795.pdf323.3 кб

Индукция и репарация двунитевых разрывов ДНК в клетках линии V79 при длительном воздействии низкоинтенсивного у-излучения

Год: 2013, том 9 Номер: №4 Страницы: 787-791
Рубрика: Генетика Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Озеров И.В., Бушманов А.Ю., Анчишкина Н.А., Гурьев Д.В., Пустовалова М.В., Сметанина Н.М., Архангельская Е.Ю., Воробьева Н.Ю., Осипов А.Н.
Организация: ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства»,
Резюме:

Цель: изучить закономерности изменений количества двунитевых разрывов (ДР) ДНК в клетках млекопитающих при длительном воздействии низкоинтенсивного у-излучения. Материал и методы. В работе использовали культуру фибробластов легкого китайского хомячка (линия V79). Облучение клеток у-лучами при мощности дозы 0,1 мГр/мин проводили на установке «Гамма-Панорама» (Cs-137). Для оценки изменений количества ДР ДНК использовали иммунофлуоресцентный анализ фокусов фосфорилированного гистона Н2АХ (у-Н2АХ). Частоту апоптотических клеток определяли методом «ДНК-гало». Для анализа продукции активных форм кислорода (АФК) использовали 5 (6) — хлорметил-2,7-дихлордигидрофлуоресцеиндиацетат. Результаты. Продемонстрировано, что при длительном низкоинтенсивном облучении клеток линии V79 в ранние сроки облучения (6-24 ч, дозы 3,6-14,4 сГр) наблюдается увеличение количества фокусов у-Н2АХ и продукции АФК, а в более поздние сроки (48-72 ч, дозы 28,8-43,2 сГр) снижение этих показателей практически до контрольного уровня. Статистически достоверных изменений доли апоптотических клеток при этом обнаружено не было. Заключение. Процессы, обусловливающие изменения количества ДР ДНК в клетках млекопитающих при длительном воздействии низкоинтенсивного у-излучения, по всей видимости, сопряжены с развитием оксидативного стресса и последующей активизацией антиоксидантных защитных систем клеток.

Прикрепленный файлРазмер
2013_04-01_787-791.pdf362.58 кб