Саратовский научно-медицинский ЖУРНАЛ

Генетика

Новый метод комплексной криоконсервации и радиационной стерилизации сосудистых аллотрансплантатов человека для тканевой инженерии

Год: 2015, том 11 Номер: №4 Страницы: 624-632
Рубрика: Генетика Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Лаук-Дубицкий С.Е., Астрелина Т.А., Сапрыкин В.П., Федюнин А.А., Паклина О.В., Гордеев А.В., Шакуров А.В., Беликов Н.В., Хайдукова И.В., Бурков И.А., Антонов Е.А., Пономарев Д.Е., Кобзева И.В., Саврасов Г.В., Воробьев Г.В., Брумберг В.А., Никитина В.А., Сучкова Ю.Б., Добровольская Е.И., Карасева Т.В., Губарев К.К., Бушманов А.Ю., Самойлов А.С.
Организация: ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства», , ФГБОУ ВПО «Московский государственный технический университет им. Н.Э. Баумана», ГБУ «Городская клиническая больница им. С.П. Боткина»
Резюме:

Цель: оценить новые способы криоконсервации, размораживания и стерилизации сосудистых аллотрансплантатов человека маргинального происхождения для тканевой инженерии с помощью перспективного хла-доносителя— полидиметилсилоксана и без использования криопротекторных и витрифицирующих растворов, что позволит использовать эти аллотрансплантаты после размораживания и децеллюляризации, а также разработать протокол безопасной криоконсервации сложных тканеинженерных сосудистых конструкций. Материал и методы. После математического моделирования процесса охлаждения и его тестирования проведен опыт по изолированному замораживанию в условиях низких температур с помощью хладоносителя— полидиметилсилоксана 30 участков бедренных артерий длиной не менее 10 см от 15 маргинальных доноров в возрасте 65-85 лет с одинаковым распределением по полу. После процедуры размораживания в этом же хладоносителе аллотрансплантаты были подвергнуты проверке их физико-механических свойств на аппарате Instron. По итогам проведено моделирование режима их стерилизации в замороженном виде. Результаты. Оценка физико-механических свойств и ограниченное гистологическое исследование показали соответствие параметров размороженных аллотрансплантатов из одной из шести групп с нативными сосудами. Остальные данные требуют дополнительной проверки. Заключение. Опробованный метод криоконсервации и размораживания аллотрансплантатов показал эффективность и возможность использования в дальнейшей работе.

Прикрепленный файлРазмер
2015_04-01_624-632.pdf1.19 Мб

Цитогенетическое обследование в отдаленные сроки после пребывания в зоне Семипалатинского атомного полигона

Резюме:

Цель: ретроспективная цитогенетическая индикация доз, возможно полученных отдельными индивидуумами при проживании в регионе Семипалатинского атомного полигона, при работе или прохождении службы в рядах Вооруженных сил на нем. Материал и методы. Выполнялся анализ аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови 16 человек с помощью FISH-метода. Результаты. В 7 случаях из 16 частоты FISH-регистрируемых транслокаций статистически значимо не отличались от контрольных значений; у остальных 9 обследованных лиц оценки полученных доз облучения варьировали от 0,20 до 0,75 Зв. Заключение. FISH-методика анализа аберраций хромосом позволяет производить ретроспективную оценку дозы, однако для более правильной трактовки получаемых результатов желательно одновременно производить и классический анализ. Для лиц, находившихся в зонах загрязнения альфа-излучающими радионуклидами, характерно обнаружение в культурах лимфоцитов периферической крови единичных сильноаберрантных клеток, дающих возможность говорить о радиационном поражении, но не позволяющих производить дозовые оценки.

Прикрепленный файлРазмер
2015_04-01_620-624.pdf319.61 кб

Анализ получения децеллюляризированных матриксов и их применения в сердечно-сосудистой хирургии

Год: 2015, том 11 Номер: №4 Страницы: 615-620
Рубрика: Генетика Тип статьи: Обзор
Авторы: Брумберг В.А., Лаук-Дубицкий С.Е., Астрелина Т.А., Кобзева И.В., Бушманов А.Ю., Самойлов А.С.
Организация: ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства»,
Резюме:

Проанализированы литературные данные по применению децеллюляризированных матриксов в сердечнососудистой хирургии, а также оценен ряд методических подходов, используемых для их получения. Использовались ресурсы научно-исследовательских данных систем Pubmed, Science Direct. Предпочтение отдавалось наиболее информативным работам за последние десять лет.

Прикрепленный файлРазмер
2015_04-01_615-620.pdf333.47 кб

Экспрессия зрелых микроРНК, участвующих в функционировании р53-зависимой системы сохранения стабильности генома, у лиц, облученных в клинически значимых дозах

Резюме:

Цель: исследовать содержание зрелых микроРНК, участвующих в функционировании р53-зависимой системы сохранения стабильности генома, в крови пациентов в отдаленные сроки после облучения в клинически значимых дозах и сопоставить эти показатели с развитием злокачественных опухолей в период отдаленных последствий лучевого поражения. Материал и методы. Объектом исследования явилась кровь пациентов с диагнозом: острая лучевая болезнь (ОПБ), острая лучевая болезнь с развитием местных лучевых поражений (ОЛБ+МЛП) и местные лучевые поражения (МЛП), полученная через 1-51 год после лучевого поражения. Зрелые mir34a, mir21, mir145, mir16, mir125b, Iet7a, содержащиеся в общей фракции РНК, были обратно транскрибированы с использованием специфических "stem-loop" — праймеров. Методом ПЦР в реальном времени определялось относительное количество микроРНК в крови пациентов. Статистическая обработка результатов проводилась с использованием непараметрического критерия Манна — Уитни. Данные приведены как медиана и квартили, нормированные к медиане группы «контроль», принятой за 1. Результаты. Обнаружено достоверное снижение mir34a, mir21 в крови пациентов с диагнозом ОЛБ и увеличение содержания mir145 у больных МЛП. Анализ индивидуальных значений микроРНК в крови больных, у которых был выявлен рак, за исключением больных с базалиомами, показал соответствия изменений с риском развития канцерогенеза. Заключение. Впервые исследована функциональная активность р53-зависимой системы сохранения стабильности генома по содержанию микроРНК в крови пациентов, облученных в клинически значимых дозах, спустя годы после лучевого поражения. Обнаружено достоверное снижение mir34a, mir21 в группе больных ОЛБ и увеличение mir145 у больных МЛП. Полученные результаты позволяют надеяться, что дальнейшие исследования, с расширением групп обследуемых пациентов и анализом динамики изменения показателей, позволят использовать микроРНК в качестве показателей риска формирования отдаленных последствий после ОЛБ и МЛП.

Прикрепленный файлРазмер
2014_04-01_749-753.pdf418.61 кб

Иммуногенетические маркеры болезни Крона у взрослого населения Московского региона

Резюме:

Цель: изучить иммуногенетические маркеры предрасположенности и протекции к развитию болезни Крона (БК) у взрослого населения Московского региона. Материал и методы. В исследование включены 53 образца периферической крови больных БК Московского региона. Контрольную группу составили 1700 образцов пупо-винной крови новорожденных условно здоровых детей. Изучение вариантов групп аллелей HLA проводили методом генотипирования с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР). Использовались коммерческие наборы по методу SSO (Sequence Specific Oligonucleotides) с применением специфических олигонуклеотидных зондов и по методу SSP (Sequence Specific Primer) с применением специфических праймеров (Ivitrogen). Ре- зультаты. Обнаружены положительная и отрицательная ассоциации групп аллелей HLA с клинической формой, течением заболевания БК и ответом на терапию глюкокортикоидами, в частности выявлено, что с развитием БК у женщин и с восприимчивостью к гормональной терапии при данном заболевании ассоциирована группа аллелей С*12. К характерным маркерам стриктурирующего типа БК относятся В*38 и А*11. Маркерами нестриктурирующего, непенетрирующего типа являются группы аллелей В*56 и С*14, причем С*14 также ассоциирована с риском развития БК у мужчин. Характерными маркерами протекции к развитию БК с хроническим рецидивирующим течением и тяжелым течением являются DQB1*02 и DQB1*03 соответственно. Заключение. Полученные результаты указывают на необходимость проведения исследований полиморфизма генов HLA-системы не только в отношении заболевания в целом, но и в отдельных клинических группах больных.

Прикрепленный файлРазмер
2014_04-01_743-749.pdf1.88 Мб

Особенности изменения числа фокусов белков уН2АХ и Rad51 в фибробластах кожи человека, подвергавшихся пролонгированному воздействию низкоинтенсивного рентгеновского излучения

Год: 2014, том 10 Номер: №4 Страницы: 739-743
Рубрика: Генетика Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Озеров И.В., Еремин П.С, Осипов А.Н., Еремин И.И., Цветкова А.Д., Гусева С.С., Иванова К.Ю., Гавриленко О.И., Пустовалова М.В., Сметанина Н.М., Грехова А.К., Лазарева Н.П., Пулин А.А., Максимова О.А., Гордеев А.В., Бушманов А.Ю., Котенко К.В.
Организация: ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства», , Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова
Резюме:

Цель: провести сравнительные исследования особенностей репарации двунитевых разрывов ДНК в клетках млекопитающих, подвергающихся острому и пролонгированному воздействию рентгеновского излучения с различной мощностью дозы. Материал и методы. Исследования выполнены на первичных культурах фи-бробластов, выделенных из биоптатов кожи здоровых добровольцев (женщины 29 и 30 лет). Облучение клеток проводили на рентгеновской биологической установке РУБ РУСТ-М1 (Россия) при температуре 37°С с мощностью дозы 400 мГр/мин (200 кВ, 2*2,4 мА, фильтр 1,5 мм AI) и 4 мГр/мин (50 кВ, 2*0,4 мА, фильтр 1,5 мм AI). Для анализа фокусов уН2АХ и Rad51 использовали иммуноцитохимическое окрашивание белков. Результаты. Проведено одновременное исследование кинетики формирования и деградации фокусов фосфорилированно-го гистона Н2АХ (уН2АХ) и ключевого белка гомологической рекомбинации Rad51 в клетках первичных фибро-бластов кожи человека, подвергавшихся острому и пролонгированному воздействию рентгеновского излучения с одинаковой накопленной дозой. Показано, что относительное число фокусов уН2АХ в пересчете на дозу облучения убывает с уменьшением мощности дозы, в то время как относительное число фокусов Rad51, наоборот, возрастает. Заключение. Полученные данные свидетельствуют о принципиальных различиях в соотношении вкладов негомологичного соединения концов и гомологической рекомбинации в репарацию ДНК в клетках, подвергавшихся острому или пролонгированному облучению.

Прикрепленный файлРазмер
2014_04-01_739-743.pdf321.12 кб

Влияние инкубации в гипертонических растворах хлорида натрия на повреждаемость ДНК лимфоцитов периферической крови человека у-излучением и перекисью водорода

Резюме:

Цель: изучить влияние инкубации в гипертонических растворах NaCI на относительный количественный выход однонитевых разрывов (ОР) и щелочно-лабильных сайтов (ЩС) ДНК, индуцированных у-излучением и перекисью водорода в лимфоцитах периферической крови человека in vitro. Материал и методы. Для исследований использовали лимфоциты, выделенные из периферической крови физически здоровых женщин-доноров в возрасте 21-26 лет. Облучение клеток в дозах 1, 2, 3 и 5 Гр проводили на установке «АГАТ-Р1» (Россия, источник у-излучения 60Со, мощность дозы 1 Гр/мин) при 4°С. С перекисью водорода (25, 50 и 100 мкмоль/л) клетки инкубировали 15 мин при 4°С. Анализ ОР и ЩС ДНК проводили с помощью метода ДНК-комет в щелочных условиях. Результаты. Инкубация клеток в 0,35 моль/л растворе NaCI (диссоциация негистоновых белков) приводит к увеличению выхода ОР и ЩС ДНК, индуцируемых у-излучением и перекисью водорода, приблизительно в 1,3 раза. Увеличение концентрации NaCI до 0,6 моль/л (диссоциация линкерного гистона Н1) приводит почти к двойному увеличению выхода повреждений ДНК (~ в 1,7-1,8 раза). Дальнейшее повышение концентрации NaCI, ведущее к нарушению структуры нуклеосом (1,2 моль/л) и почти полной депротеинизации хроматина (2 моль/л), увеличивает выход повреждений ДНК не столь выраженно, как предполагалось (~ в 2,2 раза при концентрации 2 моль/л). Заключение. Результаты исследований показали, что инкубация в гипертонических растворах NaCI значительно увеличивает чувствительность ДНК лимфоцитов к повреждающему действию свободных радикалов.

Прикрепленный файлРазмер
2014_04-01_735-739.pdf391.19 кб

Неполное соответствие экспериментальных и эпидемиологических данных для частоты генной перестройки RET/PTC в папиллярных карциномах щитовидной железы применительно к аварии на Чернобыльской АЭС

Резюме:

В обзорно-аналитическом исследовании рассмотрены эпидемиологические данные о частоте генных перестроек RET/PTC в спорадических и радиогенных (пациенты после радиотерапии, резиденты загрязненных после аварии на Чернобыльской АЭС территорий, пострадавшие от атомных бомбардировок и др.) карциномах щитовидной железы (ЩЖ). В целом обнаруженные эпидемиологические закономерности подтверждались в радиобиологических экспериментах при облучении различных культур клеток ЩЖ и воздействия ex vivo, за исключением чернобыльских когорт. Индукция генных перестроек RET/РТС предполагаемой экспозицией 1311 в детских карциномах резидентов Чернобыля в опытах на мышах также не воспроизводилась. Сделан вывод, что ситуация с частотой перестроек RET/РТС в карциномах ЩЖ в чернобыльских когортах еще раз подтверждает мультифакторный характер индукции и развития этих опухолей, со вкладом как облучения, так и нерадиационных воздействий (йоддефицит и стрессы различной природы).

Прикрепленный файлРазмер
2013_04-01_795-801.pdf317.96 кб

Сравнительные исследования выхода однонитевых разрывов и щелочнолабильных сайтов ДН К при воздействии 365 нм ультрафиолетового и рентгеновского излучений на лимфоциты периферической крови человека

Резюме:

Цель; сравнить количественный выход однонитевых разрывов (ОР) и щелочнолабильных сайтов (ЩС) ДНК, индуцированных 365 нм ультрафиолетовым (УФ) и рентгеновским излучениями в лимфоцитах периферической крови человека in vitro. Материал и методы. Выделение лимфоцитов крови человека проводили путем центрифугирования в градиенте плотности фикол-верографин. Облучение клеток проводили на УФ-установке BLX-365 (длина волны 365±10 нм) и рентгеновской биологической установке РУБ РУСТ-М1. Анализ ОР и ЩС ДНК проводили с использованием метода ДНК-комет в щелочных условиях. Результаты. Впервые показано, что выход ОР и ЩС ДНК в лимфоцитах крови человека при воздействии 365 нм УФ излучения в дозе 10 кДж/м2 соответствует эффекту рентгеновского излучения ~ в дозе 1 Гр. Заключение. Воздействие 365 нм УФ излучения в дозе 1 кДж/м2 на лимфоциты периферической крови человека индуцирует -100 ОР ДНК на клетку.

Прикрепленный файлРазмер
2013_04-01_791-795.pdf323.3 кб

Индукция и репарация двунитевых разрывов ДНК в клетках линии V79 при длительном воздействии низкоинтенсивного у-излучения

Год: 2013, том 9 Номер: №4 Страницы: 787-791
Рубрика: Генетика Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Озеров И.В., Бушманов А.Ю., Анчишкина Н.А., Гурьев Д.В., Пустовалова М.В., Сметанина Н.М., Архангельская Е.Ю., Воробьева Н.Ю., Осипов А.Н.
Организация: ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства»,
Резюме:

Цель: изучить закономерности изменений количества двунитевых разрывов (ДР) ДНК в клетках млекопитающих при длительном воздействии низкоинтенсивного у-излучения. Материал и методы. В работе использовали культуру фибробластов легкого китайского хомячка (линия V79). Облучение клеток у-лучами при мощности дозы 0,1 мГр/мин проводили на установке «Гамма-Панорама» (Cs-137). Для оценки изменений количества ДР ДНК использовали иммунофлуоресцентный анализ фокусов фосфорилированного гистона Н2АХ (у-Н2АХ). Частоту апоптотических клеток определяли методом «ДНК-гало». Для анализа продукции активных форм кислорода (АФК) использовали 5 (6) — хлорметил-2,7-дихлордигидрофлуоресцеиндиацетат. Результаты. Продемонстрировано, что при длительном низкоинтенсивном облучении клеток линии V79 в ранние сроки облучения (6-24 ч, дозы 3,6-14,4 сГр) наблюдается увеличение количества фокусов у-Н2АХ и продукции АФК, а в более поздние сроки (48-72 ч, дозы 28,8-43,2 сГр) снижение этих показателей практически до контрольного уровня. Статистически достоверных изменений доли апоптотических клеток при этом обнаружено не было. Заключение. Процессы, обусловливающие изменения количества ДР ДНК в клетках млекопитающих при длительном воздействии низкоинтенсивного у-излучения, по всей видимости, сопряжены с развитием оксидативного стресса и последующей активизацией антиоксидантных защитных систем клеток.

Прикрепленный файлРазмер
2013_04-01_787-791.pdf362.58 кб